TFIIF RAP 74 Double Nickase Plasmid (h): sc-405237-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TFIIF RAP 74 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TFIIF RAP 74 Double-Nickase-Plasmid (h) und TFIIF RAP 74 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GTF2F1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TFIIF RAP 74 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405237-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TFIIF RAP 74 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405237-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GTF2F1 kodiert TFIIF RAP 74, eine zentrale Untereinheit des allgemeinen Transkriptionsfaktors IIF, der mit der RNA-Polymerase II zusammenwirkt und die Bildung des Präinitiationskomplexes, das Promoter-Escape sowie die frühe Elongation unterstützt. In Koordination mit TFIIB, TFIIE und TFIIH trägt TFIIF dazu bei, die Nutzung von Transkriptionsstartstellen zu modulieren, und beeinflusst genomeweite Transkriptionsprogramme, die mit der Zellzykluskontrolle und der stressabhängigen Genexpression verknüpft sind. Störungen in Netzwerken von Pol-II-Transkriptionsfaktoren, einschließlich Komponenten von TFIIF, werden häufig im Zusammenhang mit Transkriptionsfehlregulation, Replikationsstress und veränderter Proteostase untersucht, wie sie in unterschiedlichen Krankheitsmodellen beobachtet werden. GTF2F1 ist daher ein nützlicher Knotenpunkt, um Abhängigkeiten der Transkriptionsmaschinerie und deren nachgelagerte Effekte auf die Chromatinorganisation und Signalwege zu untersuchen.
TFIIF RAP 74 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GTF2F1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GTF2F1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GTF2F1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GTF2F1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.