Plásmido Doble Nickase (m) TFEB: sc-437332-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)TFEB consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa TFEB (m) y el plásmido de doble nickasa TFEB (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Tfeb. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) TFEB | sc-437332-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen **Tfeb** de ratón codifica **TFEB**, un factor de transcripción de tipo hélice-bucle-hélice básica con cremallera de leucina que actúa como regulador maestro de la biogénesis lisosomal y la autofagia al coordinar la red génica **CLEAR**. La actividad de TFEB está estrictamente controlada por vías de detección de nutrientes y estrés, incluida la fosforilación dependiente de **mTORC1**, que influye en su secuestro citoplasmático frente a su translocación nuclear, ajustando así la función lisosomal, el flujo autofágico y la depuración celular. A través de estos programas, TFEB modula la proteostasis, el control de calidad mitocondrial y la señalización inmunitaria innata, conectando las señales ambientales con la remodelación catabólica. La desregulación de la señalización de TFEB se ha asociado con fenotipos de almacenamiento lisosomal, estrés proteotóxico relacionado con neurodegeneración, desequilibrio metabólico y la adaptación de células tumorales al estrés, lo que convierte a **Tfeb** en un objetivo clave para estudios mecanísticos de la homeostasis celular.
TFEB El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Tfeb en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Tfeb. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Tfeb. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Tfeb alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.