TET3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-414997-ACT

ヒトTET3はFe(II)/2-オキソグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼをコードしており、5-メチルシトシンを5-ヒドロキシメチルシトシン（5hmC）およびその下流の酸化塩基へと段階的に酸化する反応を触媒し、能動的および受動的なDNA脱メチル化を支える。こうしたエピジェネティック編集活性を通じて、TET3はクロマチンリモデリング、系譜決定、細胞ストレス応答に関与する転写プログラムを制御する。TET3の機能は、DNA修復と連動した脱メチル化過程や、細胞アイデンティティを形作るより広範なクロマチン状態維持経路とも交差する。TET3活性の破綻や5hmCパターンの変化は、発生および神経学的表現型と関連づけられており、がん生物学におけるエピジェネティック不安定性の文脈でもしばしば研究されている。

TET3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TET3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TET3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TET3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTET3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TET3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTET3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTET3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTET3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTET3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。