Plasmide CRISPR/Cas9 KO TESK2 (m): sc-432964

Présentation

La kinase 2 associée aux testicules (TESK2), codée par le gène murin *Tesk2*, est une kinase sérine/thréonine qui régule la dynamique du cytosquelette d’actine en phosphorylant et en inhibant la cofiline, influençant ainsi le renouvellement des filaments, la forme cellulaire et la motilité. L’activité de TESK2 relie des signaux en amont, notamment des voies impliquant les GTPases de la famille Rho, aux processus de remodelage du cytosquelette qui affectent l’adhérence, la migration et le trafic vésiculaire. Son expression est enrichie dans les tissus testiculaires et les cellules germinales, ce qui étaye des rôles dans la spermatogenèse et la réorganisation du cytosquelette au cours de la maturation des cellules germinales. Une signalisation TESK2 dérégulée et le remodelage de l’actine dépendant de la cofiline sont couramment étudiés dans des modèles de migration cellulaire altérée et d’architecture tissulaire modifiée, ce qui les rend pertinents pour des études mécanistiques de troubles du développement et de la prolifération.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TESK2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tesk2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tesk2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tesk2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TESK2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tesk2 pour l'étude de la signalisation de TESK2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tesk2 essentiels à la fonction de TESK2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tesk2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TESK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TESK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tesk2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TESK2 plasmide HDR (m) et le TESK2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tesk2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tesk2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.