TCTE2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423316

Descripción general

Tcte2 codifica TCTE2, una proteína asociada a cilios y flagelos implicada en el ensamblaje y la función de los axonemas móviles en células de ratón. Al favorecer el deslizamiento de microtúbulos impulsado por dineína y el batido ciliar coordinado, TCTE2 contribuye a procesos como la maduración de las espermátidas y la motilidad espermática, lo que la vincula con la biología reproductiva y la ciliogénesis. La alteración de componentes de los cilios móviles, en general, puede afectar el aclaramiento mucociliar, el flujo del líquido cefalorraquídeo y el establecimiento de la lateralidad izquierda–derecha, por lo que TCTE2 es relevante para estudios mecanísticos de ciliopatías. Por tanto, TCTE2 resulta útil para investigar la organización axonemal, la homeostasis asociada al transporte intraflagelar y las consecuencias específicas según el tipo celular de una motilidad alterada.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TCTE2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tcte2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tcte2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tcte2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TCTE2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tcte2 para la investigación de la señalización de TCTE2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tcte2 críticos para la función de TCTE2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tcte2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TCTE2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TCTE2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tcte2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TCTE2 (m) y el plásmido HDR TCTE2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tcte2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tcte2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.