Plasmide CRISPR/Cas9 KO TCTE2 (m): sc-423316

Présentation

Tcte2 code TCTE2, une protéine associée aux cils et aux flagelles, impliquée dans l’assemblage et la fonction des axonèmes motiles dans les cellules de souris. En soutenant le glissement des microtubules entraîné par la dynéine et la coordination du battement ciliaire, TCTE2 contribue à des processus tels que la maturation des spermatides et la motilité des spermatozoïdes, ce qui l’inscrit dans la biologie de la reproduction et la ciliogenèse. La perturbation, de manière générale, des composants des cils motiles peut affecter la clairance mucociliaire, l’écoulement du liquide céphalo-rachidien et l’établissement de l’asymétrie gauche–droite, rendant TCTE2 pertinent pour des études mécanistiques des ciliopathies. TCTE2 est donc utile pour étudier l’organisation axonémale, l’homéostasie associée au transport intraflagellaire et les conséquences spécifiques à certains types cellulaires d’une motilité altérée.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TCTE2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tcte2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tcte2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tcte2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TCTE2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tcte2 pour l'étude de la signalisation de TCTE2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tcte2 essentiels à la fonction de TCTE2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tcte2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TCTE2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TCTE2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tcte2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TCTE2 plasmide HDR (m) et le TCTE2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tcte2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tcte2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.