Particules Lentivirales d'Activation (h) TCF7L2/TCF4: sc-400607-LAC

TCF7L2 (également appelé TCF4) code un facteur de transcription à boîte HMG (high-mobility group) qui agit comme un effecteur nucléaire clé de la signalisation canonique Wnt/β-caténine. En s’associant à la β-caténine et à des co‑régulateurs, TCF7L2 contrôle des programmes transcriptionnels dépendants du contexte, qui gouvernent la spécification du destin cellulaire, la prolifération et l’expression de gènes métaboliques dans de nombreux tissus. Son réseau de régulation interfère avec le remodelage de la chromatine et l’activité des enhancers, orientant les décisions de lignée dans les compartiments épithéliaux et endocriniens. Des perturbations génétiques et d’expression de TCF7L2 sont fortement associées à une altération de l’homéostasie du glucose et à un risque accru de diabète de type 2, et la transcription dépendante de Wnt impliquant TCF7L2, lorsqu’elle est dérégulée, est étudiée en tumorigenèse et en biologie du développement.

Les particules d'activation lentivirales TCF7L2/TCF4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TCF7L2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TCF7L2/TCF4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TCF7L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TCF7L2/TCF4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TCF7L2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.