Plasmide Double Nickase (h) TBK1: sc-401066-NIC

TBK1 (TANK-binding kinase 1) est une kinase sérine/thréonine qui intègre les signaux de l’immunité innée et du stress en phosphorylant des substrats clés tels qu’IRF3/IRF7, afin de déclencher des réponses à l’interféron de type I en aval des récepteurs de reconnaissance de motifs. Elle interagit également avec la signalisation NF-κB via des complexes adaptateurs incluant TANK, NAP1 et SINTBAD, façonnant ainsi des programmes transcriptionnels inflammatoires. Au-delà de l’immunité, TBK1 régule l’autophagie sélective et la mitophagie par phosphorylation de récepteurs de l’autophagie tels que l’optineurine et p62/SQSTM1, reliant la détection des pathogènes au contrôle qualité des organites. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de TBK1 ont été associées à des phénomènes de neurodégénérescence et à des états inflammatoires dérégulés, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée pour des études mécanistiques sur le dialogue entre immunité et autophagie.

TBK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TBK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TBK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TBK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TBK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.