Plasmide CRISPR d'Activation (h) TAT: sc-405240-ACT

Le gène humain **TAT** code la tyrosine aminotransférase, une enzyme cytosolique dépendante du phosphate de pyridoxal (PLP) qui catalyse la première étape du catabolisme de la tyrosine en convertissant la L-tyrosine en p-hydroxyphénylpyruvate. Cette réaction relie le renouvellement des acides aminés à la gestion hépatique de l’azote et à des voies en aval qui alimentent le métabolisme énergétique et l’équilibre rédox. L’expression de **TAT** est étroitement régulée par des signaux hormonaux et nutritionnels, intégrant des programmes transcriptionnels répondant aux glucocorticoïdes et aux états de jeûne. Une perturbation de la dégradation de la tyrosine est associée à des maladies métaboliques héréditaires telles que la tyrosinémie de type II et peut éclairer l’étude de la physiologie hépatique, de l’homéostasie des acides aminés et de la signalisation du stress métabolique.

TAT Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TAT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TAT Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TAT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TAT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TAT. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TAT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TAT au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TAT dans les cellules tumorales présentant une expression de TAT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.