Plásmido Doble Nickase (h) TARDBP: sc-401890-NIC

TARDBP (TDP-43) es una proteína de unión a ARN/ADN expresada de manera ubicua que regula múltiples niveles del metabolismo del ARN, incluidos el empalme del pre-ARNm, la estabilidad de los transcritos y su transporte, y también participa en la regulación transcripcional. Se localiza predominantemente en el núcleo, pero puede desplazarse al citoplasma y es reclutada a los gránulos de estrés durante el estrés celular, lo que la vincula a la proteostasis y a procesos de control de calidad del ARN. El procesamiento de ARN dependiente de TARDBP ayuda a mantener la homeostasis neuronal al modular programas de empalme y prevenir la inclusión aberrante de exones crípticos en transcritos neuronales largos. La desregulación, la relocalización anómala y la agregación de TDP-43 se asocian estrechamente con mecanismos de enfermedades neurodegenerativas, incluidas la ELA y la degeneración lobar frontotemporal, y también se estudian en contextos más amplios de disfunción de proteínas de unión a ARN.

TARDBP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TARDBP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TARDBP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TARDBP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TARDBP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.