Plásmido CRISPR de Activación (m) TARDBP: sc-433014-ACT

El gen murino **Tardbp** codifica TARDBP (TDP-43), una proteína multifuncional de unión a ARN y ADN que regula la transcripción, el empalme (splicing) del pre-ARNm, la estabilidad y el transporte del ARNm, y la dinámica de los gránulos de estrés. TARDBP coordina programas del metabolismo del ARN que influyen en la diferenciación neuronal, la función sináptica y la proteostasis, y participa en una retroalimentación autorregulatoria que mantiene una homeostasis de expresión estrictamente controlada. La alteración de la localización de TARDBP o de su actividad de unión al ARN perturba el ensamblaje de ribonucleoproteínas y puede modificar la expresión de genes implicados en la organización del citoesqueleto y la función mitocondrial. La biología anómala de TARDBP se asocia estrechamente con mecanismos relacionados con la neurodegeneración, incluidos cambios en el procesamiento del ARN y en las vías de agregación proteica, lo que la convierte en un nodo clave para modelar fenotipos celulares relevantes para la enfermedad en sistemas murinos.

TARDBP El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Tardbp sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TARDBP El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Tardbp en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Tardbp, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TARDBP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Tardbp y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TARDBP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TARDBP en células tumorales con expresión de Tardbp silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.