Plásmido CRISPR de Activación (h) TARDBP: sc-401890-ACT

TARDBP codifica TDP-43, una proteína de unión a ARN/ADN que regula el empalme (splicing) del pre-ARNm, la estabilidad del ARNm y su transporte, con funciones destacadas en el metabolismo del ARN neuronal y en la dinámica de los gránulos de estrés. Al unirse a motivos de ARN ricos en UG, TDP-43 modula programas de empalme alternativo y mantiene la integridad del transcriptoma, vinculándose así a vías que controlan la proteostasis, el transporte nucleocitoplasmático y las respuestas celulares al estrés. La desregulación de la localización de TDP-43 y su agregación es un sello distintivo de múltiples trastornos neurodegenerativos, y las alteraciones del splicing dependiente de TARDBP se han implicado en redes génicas relevantes para la enfermedad. Como resultado, TARDBP se estudia ampliamente para investigar mecanismos de procesamiento del ARN, neurotoxicidad y control de la expresión génica en modelos de células humanas.

TARDBP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TARDBP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TARDBP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TARDBP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TARDBP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TARDBP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TARDBP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TARDBP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TARDBP en células tumorales con expresión de TARDBP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.