Plásmido CRISPR de Activación (h) TARC: sc-401905-ACT

CCL17 codifica la quimiocina regulada por timo y activación (TARC), una quimiocina CC secretada que promueve la migración dirigida de células T que expresan CCR4, incluidas subpoblaciones polarizadas hacia Th2, hacia sitios de inflamación. Al moldear el tráfico leucocitario y la comunicación entre células dendríticas y células T, TARC contribuye al posicionamiento de las células inmunitarias dentro de los tejidos y a la coordinación de respuestas impulsadas por citocinas en la red de señalización de quimiocinas. La expresión desregulada de CCL17/TARC se estudia con frecuencia en la inflamación alérgica y otras patologías mediadas por el sistema inmunitario en las que los gradientes quimiotácticos alterados influyen en la infiltración inmunitaria y la remodelación tisular. En sistemas modelo humanos, CCL17 sirve como una lectura accesible de la activación de circuitos inflamatorios y como un nodo para analizar el comportamiento del eje quimiocina–receptor.

TARC El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CCL17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TARC El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CCL17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CCL17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TARC. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CCL17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TARC en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TARC en células tumorales con expresión de CCL17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.