Talin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400783-ACT

Humanes TLN2 kodiert Talin-2, einen großen zytoskelettalen Adapter, der die zytoplasmatischen Schwänze von Integrin-β mit F‑Aktin verbindet, die Bildung fokaler Adhäsionen fördert und mechanische Reize in intrazelluläre Signale übersetzt. Durch die Regulation der Integrinaktivierung, der Generierung von Zugkräften und des Adhäsionsumsatzes beeinflusst Talin-2 Zellmigration, Gewebearchitektur und mechanosensitive Signalwege, die mit der FAK/Src‑ und der Rho‑GTPase‑Signalgebung zusammenlaufen. Die TLN2‑Aktivität ist besonders in Kontexten relevant, die eine robuste Adhäsion und Kraftübertragung erfordern, einschließlich der Muskel- und Herzbiologie, und ihre Fehlregulation wurde in Krebsmodellsystemen mit veränderter Zellmotilität und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen TLN2 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung adhäsionsabhängiger Signalgebung, zytoskelettaler Umgestaltung und mechanotransduktionsgetriebener Transkriptionsprogramme.

Talin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TLN2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Talin-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TLN2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TLN2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Talin-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TLN2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Talin-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Talin-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TLN2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.