Tak1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400364-ACT

Das humane MAP3K7-Gen kodiert die Transforming-Growth-Factor-β‑aktivierte Kinase 1 (TAK1), eine MAP3K, die Signale von proinflammatorischen Zytokinen, Toll-like- und IL‑1‑Rezeptoren sowie Liganden der TGF‑β‑Familie integriert. TAK1 aktiviert nachgeschaltete NF‑κB‑ und MAPK‑Signalkaskaden, einschließlich der p38‑, JNK‑ und ERK‑Wege, und reguliert damit Transkriptionsprogramme, die angeborene Immunantworten, Apoptose und Stressanpassung steuern. Über seine Funktionen in ubiquitinabhängigen Signalkomplexen und durch kinasevermittelte Phosphorylierungsereignisse beeinflusst TAK1 Zellschicksalsentscheidungen in zahlreichen Gewebekontexten. Eine Fehlregulation der MAP3K7/TAK1‑Signalübertragung wurde mit entzündlicher Pathobiologie und onkogenen Prozessen in Verbindung gebracht, bei denen veränderte NF‑κB/MAPK‑Aktivität Überlebens‑ und Zytokinnetzwerke umgestaltet.

Tak1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAP3K7-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Tak1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAP3K7-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAP3K7-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Tak1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAP3K7-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Tak1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Tak1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAP3K7-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.