T2-cadherin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401926-ACT

CDH10 kodiert T2-Cadherin, ein calciumabhängiges Zell-Zell-Adhäsionsmolekül aus der Cadherin-Superfamilie, das zur Gewebearchitektur beiträgt, indem es homophile Interaktionen an der Plasmamembran unterstützt. Durch die Kopplung von Adhäsionskomplexen an die Umgestaltung des Aktinzytoskeletts beeinflusst T2-Cadherin kontaktvermittelte Signalwege, die Zellpolarität und koordinierte Migrationsprogramme. Die CDH10-Expression ist besonders in neuronalen und epithelialen Kontexten ausgeprägt und wird daher mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die das Neuritenauswachsen und die synaptische Konnektivität sowie die epitheliale Organisation formen. Eine fehlregulierte cadherinvermittelte Adhäsion, einschließlich veränderter CDH10-Aktivität, wird häufig in Studien zu Entwicklungsstörungen und zur Tumorbiologie untersucht, in denen Veränderungen der Zelladhäsion und Invasivität zentrale Phänotypen darstellen.

T2-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDH10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

T2-cadherin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDH10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDH10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen T2-cadherin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDH10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von T2-cadherin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des T2-cadherin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDH10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.