SYP/Synaptophysin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423242

Descripción general

Syp codifica la sinaptofisina (SYP), una glucoproteína abundante de la membrana de las vesículas sinápticas, ampliamente utilizada como marcador presináptico en el sistema nervioso del ratón. SYP participa en el tráfico de vesículas sinápticas, la exoendocitosis y el reciclaje dependiente de la actividad mediante interacciones con la maquinaria de fusión vesicular y endocítica, lo que ayuda a mantener la capacidad de liberación de neurotransmisores. La expresión alterada de sinaptofisina y los cambios en la dinámica de las vesículas presinápticas se han asociado con una conectividad sináptica alterada y se evalúan con frecuencia en estudios de mecanismos del neurodesarrollo y la neurodegeneración. Como componente central de las terminales presinápticas, SYP proporciona un punto de entrada funcional para analizar cambios a nivel de circuito que surgen por un ciclado vesicular deficiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SYP/Synaptophysin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Syp en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Syp junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Syp tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SYP/Synaptophysin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Syp para la investigación de la señalización de SYP/Synaptophysin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Syp críticos para la función de SYP/Synaptophysin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Syp para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SYP/Synaptophysin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SYP/Synaptophysin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Syp. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SYP/Synaptophysin (m) y el plásmido HDR SYP/Synaptophysin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Syp para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Syp definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.