Syne-2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-403318-LAC

SYNE2 codifica a Syne-2 (nesprina-2), uma proteína gigante rica em repetições de espectrina do complexo LINC, que atravessa a membrana nuclear externa e acopla o núcleo ao citoesqueleto de actina por meio de interações do domínio KASH com proteínas SUN. Essa ligação núcleocitoesquelética sustenta o posicionamento nuclear, a mecanotransdução e a organização do citoesqueleto perinuclear, com efeitos a jusante sobre a polaridade celular, a migração e as dinâmicas nucleares associadas ao ciclo celular. Por seu papel na manutenção da arquitetura do envelope nuclear e na transmissão de forças, a Syne-2 influencia a organização da cromatina e respostas transcricionais a estímulos mecânicos. Alterações na função ou na expressão de SYNE2 têm sido associadas a fenótipos envolvendo instabilidade do envelope nuclear e são estudadas no contexto de cardiomiopatias, da biologia de doenças neuromusculares e da invasividade de células tumorais.

As Partículas de Ativação Lentivirais Syne-2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SYNE2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Syne-2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SYNE2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Syne-2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SYNE2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.