Plásmido CRISPR de Activación (h) Synaptotagmin VII: sc-404291-ACT

SYT7 codifica la sinaptotagmina VII, una proteína de membrana sensible al Ca2+ que regula la exocitosis dependiente de Ca2+ y la reparación de la membrana mediante la fusión de vesículas mediada por SNARE. Participa en la exocitosis de lisosomas secretores, en el resellado de la membrana plasmática tras una lesión y en la liberación regulada de cargas en células inmunitarias y de tipo neuronal, conectando la señalización del calcio con el tráfico vesicular. La actividad de la sinaptotagmina VII influye en procesos como la dinámica de liberación de neurotransmisores, la secreción de citocinas y el tráfico endosomal/lisosomal. La expresión o función alteradas de SYT7 se han asociado con fenotipos de secreción desregulada y de homeostasis de membrana relevantes para la neurobiología, la inflamación y las respuestas celulares al estrés.

Synaptotagmin VII El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SYT7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Synaptotagmin VII El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SYT7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SYT7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Synaptotagmin VII. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SYT7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Synaptotagmin VII en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Synaptotagmin VII en células tumorales con expresión de SYT7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.