Particules Lentivirales d'Activation (m) Synaptojanin 2: sc-423241-LAC

Synj2 chez la souris code la synaptojanine 2, une 5‑phosphatase des phosphoinositides qui hydrolyse le PI(4,5)P2 et des lipides apparentés afin de façonner l’identité membranaire et la signalisation. En régulant le renouvellement des phosphoinositides, la synaptojanine 2 soutient l’endocytose médiée par la clathrine, le trafic vésiculaire et la dynamique du cytosquelette d’actine aux sites de remodelage membranaire. Ces fonctions interfèrent avec l’internalisation des récepteurs et les voies de signalisation en aval qui contrôlent la prolifération, la migration et des processus synaptiques ou sécrétoires dans des types cellulaires spécialisés. Une dérégulation du métabolisme des phosphoinositides et du trafic endocytique est largement impliquée en neurobiologie et dans des comportements cellulaires pertinents pour le cancer, ce qui fait de Synj2 un nœud utile pour des études mécanistiques de la signalisation membranaire.

Les particules d'activation lentivirales Synaptojanin 2 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Synj2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Synaptojanin 2 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Synj2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Synaptojanin 2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Synj2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.