Synapsin IIa CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423234

Übersicht

Syn2 kodiert Synapsin IIa, ein präsynaptisches Phosphoprotein, das mit synaptischen Vesikeln und Aktin interagiert, um die Vesikel-Clusterbildung, die Aufrechterhaltung des Reservepools und die aktivitätsabhängige Neurotransmitterfreisetzung zu regulieren. Synapsin IIa wird über Phosphorylierung nachgeschaltet an neuronalen Signalkaskaden kontrolliert, darunter PKA, CaMKII und MAPK/ERK, und verknüpft so Calciumeinstrom und Second-Messenger-Signalwege mit synaptischer Plastizität. In Modellen des Mausnervensystems wird eine veränderte Synapsin-Funktion genutzt, um Veränderungen im Erregungs‑Hemmungs‑Gleichgewicht, in der Netzwerksynchronisation und in der synaptischen Reifung zu untersuchen, die für neuroentwicklungsbedingte und neuropsychiatrische Phänotypen relevant sind. Eine Störung von Syn2 bietet einen gut handhabbaren Ansatz, um präsynaptische Mechanismen zu untersuchen, die die Stabilität neuronaler Schaltkreise und die reizinduzierte synaptische Transmission beeinflussen.

Das Synapsin IIa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Syn2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Syn2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Syn2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Synapsin IIa-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Syn2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Synapsin IIa-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Syn2-Exone abzielen, die für die Synapsin IIa-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Syn2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Synapsin IIa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Synapsin IIa CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Syn2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Synapsin IIa HDR-Plasmid (m) und Synapsin IIa HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Syn2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Syn2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.