Synapsin IIa Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423234

Descripción general

Syn2 codifica la sinapsina IIa, una fosfoproteína presináptica que se asocia con las vesículas sinápticas y la actina para regular el agrupamiento de vesículas, el mantenimiento del reservorio de vesículas y la liberación de neurotransmisores dependiente de la actividad. La sinapsina IIa se controla mediante fosforilación aguas abajo de cascadas de señalización neuronal que incluyen PKA, CaMKII y MAPK/ERK, conectando la entrada de calcio y las vías de segundos mensajeros con la plasticidad sináptica. En modelos del sistema nervioso de ratón, la función alterada de las sinapsinas se utiliza para estudiar cambios en el equilibrio excitación–inhibición, la sincronización de redes y la maduración sináptica, relevantes para fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos. La alteración de Syn2 ofrece un enfoque manejable para investigar mecanismos presinápticos que influyen en la estabilidad de los circuitos y en la transmisión sináptica evocada por estímulos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Synapsin IIa (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Syn2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Syn2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Syn2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Synapsin IIa.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Syn2 para la investigación de la señalización de Synapsin IIa, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Syn2 críticos para la función de Synapsin IIa
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Syn2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Synapsin IIa CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Synapsin IIa CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Syn2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Synapsin IIa (m) y el plásmido HDR Synapsin IIa (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Syn2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Syn2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.