Svs4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423226

Übersicht

Svs4 (seminal vesicle secretory 4) kodiert ein im männlichen Reproduktionstrakt sezerniertes Protein, das in den Samenblasen angereichert ist und mit der Zusammensetzung sowie den funktionellen Eigenschaften der Samenflüssigkeit in Zusammenhang steht. Svs4 trägt zu Prozessen nach der Paarung bei, indem es die Dynamik der Samenkoagulation, den Spermientransport und das biochemische Milieu beeinflusst, das das Überleben und die Kapazitation von Spermien unterstützt. Seine Expression ist eng an androgenregulierte Sekretionsprogramme und die Differenzierung des luminalen Epithels in akzessorischen Geschlechtsdrüsen gekoppelt. Eine veränderte Regulation sekretorischer Samenblasenproteine wird als Indikator für endokrine Disruption sowie entzündliche oder degenerative Veränderungen in männlichen Reproduktionsgeweben genutzt, wodurch Svs4 in mechanistischen Studien zu fertilitätsbezogenen Phänotypen ein nützlicher Marker ist.

Das Svs4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Svs4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Svs4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Svs4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Svs4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Svs4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Svs4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Svs4-Exone abzielen, die für die Svs4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Svs4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Svs4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Svs4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Svs4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Svs4 HDR-Plasmid (m) und Svs4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Svs4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Svs4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.