Partículas Lentivirales de Activación (m) SV2A: sc-425665-LAC

Sv2a codifica la glicoproteína 2A de las vesículas sinápticas (SV2A), una proteína de membrana abundante en vesículas secretoras que favorece la liberación de neurotransmisores dependiente de Ca2+ y el ciclo de las vesículas presinápticas. SV2A influye en el cebado de vesículas y la exocitosis al regular el tráfico de proteínas vesiculares e interactuar con componentes de la maquinaria de liberación, dando forma así a la transmisión sináptica y la excitabilidad de la red. En el sistema nervioso del ratón, la expresión de SV2A se utiliza a menudo como un indicador indirecto de la densidad y la maduración sinápticas, y se la ha implicado en el remodelado sináptico dependiente de la actividad. Las alteraciones en los niveles o la función de SV2A se han asociado con disfunción neurofisiológica y fenotipos relacionados con convulsiones, lo que convierte a Sv2a en una diana útil para estudios mecanísticos de la señalización neuronal y el neurodesarrollo.

Las partículas de activación lentiviral SV2A (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Sv2a en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SV2A (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Sv2a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SV2A. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Sv2a y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.