Su[fu] Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423973

Descripción general

Suppressor of fused (Sufu) codifica la proteína Su(fu), un regulador negativo clave de la señalización Hedgehog que restringe la actividad de los factores de transcripción GLI y ayuda a controlar programas transcripcionales que rigen el patrón embrionario, la especificación del destino celular y la homeostasis tisular. En células de ratón, SUFU funciona como un andamiaje citoplasmático que secuestra proteínas GLI y coordina su procesamiento y su acceso al núcleo, integrándose con la dinámica de la vía Hedgehog dependiente del cilio primario. La alteración de Sufu puede desplazar la salida de la vía y la expresión génica downstream, lo que la hace relevante para estudiar la lógica de señalización del desarrollo y los fenotipos celulares impulsados por Hedgehog. La función alterada de SUFU se ha asociado con una señalización Hedgehog desregulada en modelos relacionados con enfermedad, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para interrogar la vía.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Su[fu] (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sufu en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sufu junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sufu tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Su[fu].

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sufu para la investigación de la señalización de Su[fu], estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sufu críticos para la función de Su[fu]
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sufu para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Su[fu] CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Su[fu] CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sufu. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Su[fu] (m) y el plásmido HDR Su[fu] (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sufu para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sufu definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.