STK16 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423194

Übersicht

Das murine Gen **Stk16** kodiert die Serin/Threonin-Kinase 16 (STK16), eine konstitutiv aktive Kinase, die in Golgi- und membranassoziierten Kompartimenten angereichert ist und zur Proteintransportmaschinerie, zur Organisation des Golgi-Apparats sowie zur Regulation der Dynamik des sekretorischen Weges beiträgt. Die Aktivität von STK16 wird mit der Kontrolle von Programmen für Zellwachstum und -überleben in Verbindung gebracht; zudem wurde über Crosstalk mit Signal-Knotenpunkten berichtet, die Proliferation und Stressantworten beeinflussen. Durch die Modulation phosphorylierungsabhängiger Prozesse kann STK16 den intrazellulären Transport und zellzyklusassoziierte Phänotypen prägen, die für Studien zur Gewebehomöostase relevant sind. Fehlregulierte Kinase-Signalwege und veränderte Trafficking-Netzwerke werden häufig in krankheitsassoziierten zellulären Zuständen beobachtet, wodurch **Stk16** ein nützliches Ziel für mechanistische Untersuchungen von Pfadabhängigkeiten in Mausmodellen darstellt.

Das STK16 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Stk16-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Stk16-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Stk16 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die STK16-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Stk16-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der STK16-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Stk16-Exone abzielen, die für die STK16-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Stk16-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom STK16 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom STK16 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Stk16-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das STK16 HDR-Plasmid (m) und STK16 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Stk16-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Stk16-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.