Plasmide CRISPR/Cas9 KO Stim1 (h): sc-401311

Présentation

STIM1 code la molécule d’interaction stromale 1 (Stim1), un capteur de Ca2+ du réticulum endoplasmique qui déclenche l’entrée de calcium opérée par les stocks en couplant la déplétion en Ca2+ du RE à l’activation des canaux ORAI au niveau des jonctions RE–membrane plasmique. Cet influx de Ca2+ régule la transcription dépendante de NFAT, le remodelage du cytosquelette, la sécrétion, ainsi que des réseaux de signalisation plus larges dépendants du calcium qui contrôlent la prolifération et les réponses au stress. Les voies dépendantes de STIM1 sont au cœur de l’activation des cellules immunitaires et d’autres fonctions de cellules excitables et non excitables, reliant les altérations de l’homéostasie calcique à des phénotypes immunologiques et à d’autres processus physiopathologiques. Dans la biologie des maladies humaines, la dérégulation de la signalisation STIM1 est fréquemment étudiée dans le contexte d’une entrée de Ca2+ anormale et des programmes transcriptionnels en aval qui influencent les décisions de destin cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Stim1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène STIM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du STIM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert STIM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Stim1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en STIM1 pour l'étude de la signalisation de Stim1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de STIM1 essentiels à la fonction de Stim1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de STIM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Stim1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Stim1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus STIM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Stim1 plasmide HDR (h) et le Stim1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie STIM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles STIM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.