STC1 Double Nickase Plasmid (m): sc-423182-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das STC1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- STC1 Double-Nickase-Plasmid (m) und STC1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Stc1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: STC1: sc-293435
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
STC1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423182-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
STC1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423182-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Stanniocalcin 1 (STC1), codiert durch das Mausgen *Stc1*, ist ein sezerniertes Glykoprotein, das an der Homöostase von Calcium und Phosphat sowie an einer umfassenderen parakrinen Regulation der Gewebephysiologie beteiligt ist. STC1 moduliert zelluläre Stressantworten und Überlebensprogramme, einschließlich mitochondrialer Funktion, Umgang mit oxidativem Stress und metabolischer Anpassung, und wurde mit Signalzusammenhängen wie hypoxieassoziierten Signalwegen in Verbindung gebracht. Während der Entwicklung und in adulten Geweben trägt STC1 über Effekte auf Proliferation, Differenzierung und barrierebezogene Prozesse zur Gefäß- und Epithelbiologie bei. Eine dysregulierte STC1-Expression wurde in Modellen für Entzündung, Fibrose, ischämische Schädigung und Tumorbiologie beschrieben, was STC1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der mikroumgebungsabhängigen Signalgebung und stressadaptiver transkriptioneller Netzwerke macht.
STC1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Stc1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Stc1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Stc1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Stc1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.