StAR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400961-ACT

Das humane STAR-Gen kodiert das steroidogene akute regulatorische Protein (StAR), einen mitochondrienassoziierten Faktor, der den geschwindigkeitsbestimmenden Transport von Cholesterin von der äußeren zur inneren Mitochondrienmembran für die Biosynthese von Steroidhormonen vermittelt. Dieser Transportschritt ist für die Pregnenolonproduktion durch CYP11A1 essenziell und ist in die cAMP/PKA-gesteuerte steroidogene Signalgebung in Nebenniere- und Gonadenzellen eingebunden. Eine Störung oder Fehlregulation von StAR verändert die mitochondriale Cholesterinhandhabung und die nachgeschaltete Steroidogenese, wodurch STAR mit endokrinen und reproduktiven Phänotypen verknüpft ist und einen mechanistischen Ansatzpunkt für die Untersuchung des mitochondrialen Lipidtransports und des steroidogenen Stoffwechsels bietet. Daher wird STAR häufig in Modellen der Nebennieren- und Gonadenfunktion, der Stresssignalgebung und der metabolischen Kontrolle der Hormonproduktion untersucht.

StAR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen STAR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

StAR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des STAR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der STAR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen StAR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native STAR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von StAR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des StAR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem STAR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.