Partículas Lentivirales de Activación (h) St3Gal-III: sc-406298-LAC

ST3GAL3 codifica la sialiltransferasa St3Gal-III, residente en el aparato de Golgi, que cataliza la adición de ácido siálico con enlace α2,3 a la galactosa en glicoproteínas y glicolípidos, configurando las estructuras de los glicanos terminales en la superficie celular y en proteínas secretadas. Al controlar los patrones de sialilación, St3Gal-III influye en la maduración de glicoproteínas, la estabilidad de receptores y las interacciones mediadas por lectinas que afectan la señalización celular, la adhesión y el reconocimiento inmunitario. La actividad de ST3GAL3 contribuye a vías más amplias de glicosilación que regulan el tráfico a través de la vía secretora y la remodelación del glicocálix. La variación genética o la desregulación de ST3GAL3 se ha vinculado con fenotipos del neurodesarrollo y con firmas del glicoma alteradas, relevantes para la función neuronal y para cambios asociados a enfermedad en la comunicación célula–célula.

Las partículas de activación lentiviral St3Gal-III (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ST3GAL3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral St3Gal-III (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ST3GAL3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de St3Gal-III. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ST3GAL3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.