SSX5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403552-LAC

SSX5 (sarcoma sinoviale, punto di rottura X 5) codifica un antigene nucleare cancer-testis e un regolatore trascrizionale in grado di modulare, in modo dipendente dal contesto, i programmi di espressione genica associati alla cromatina. SSX5 è stato implicato in complessi di repressione trascrizionale e in stati epigenetici alterati che influenzano l’identità cellulare, la differenziazione e la capacità proliferativa. L’espressione aberrante dei membri della famiglia SSX è associata alla biologia tumorale e a pattern di espressione limitati dal punto di vista immunologico, rendendo SSX5 un modello utile per lo studio di reti trascrizionali ristrette a specifiche linee cellulari. Nelle cellule umane, SSX5 viene comunemente studiato per il suo contributo alla deregolazione dell’espressione genica, alle interazioni proteina–proteina e ai circuiti trascrizionali associati al cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale SSX5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SSX5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SSX5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SSX5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SSX5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SSX5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.