SR-A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401898-ACT

O MSR1 humano codifica o receptor varredor (scavenger) da classe A (SR-A), um recetor de reconhecimento de padrões expresso predominantemente em macrófagos e outras células mieloides, que se liga a lipoproteínas modificadas, células apoptóticas e a diversos ligandos microbianos. O SR-A contribui para o reconhecimento imunitário inato e para a depuração fagocítica, ao mesmo tempo que molda redes de sinalização inflamatória, incluindo a comunicação cruzada com vias de recetores do tipo Toll (TLR) e programas de citocinas. Pelo seu papel na captação de LDL oxidada e de detritos celulares, o MSR1 é amplamente estudado no processamento de lípidos, na biologia de células espumosas (foam cells) e na polarização de macrófagos. A atividade e a expressão desreguladas de MSR1 têm sido associadas a contextos de inflamação crónica e a mecanismos de doenças cardiometabólicas, oferecendo um ponto de entrada molecular para dissecar a regulação imunometabólica.

SR-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MSR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SR-A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MSR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MSR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SR-A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MSR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SR-A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SR-A em células tumorais com expressão de MSR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.