Plásmido CRISPR de Activación (h) SR-7: sc-404174-ACT

HTR7 codifica el receptor humano de 5-hidroxitriptamina 7 (SR-7), un receptor acoplado a proteínas G que se acopla principalmente a Gαs para aumentar el AMPc intracelular y activar señalización dependiente de PKA. SR-7 modula la excitabilidad neuronal y la plasticidad sináptica, y puede influir en programas transcripcionales aguas abajo a través de la vía AMPc/CREB, así como mediante la comunicación cruzada con las rutas ERK/MAPK. Además de sus funciones en los circuitos del sistema nervioso central, la señalización de HTR7 se ha vinculado con la regulación de los ritmos circadianos, conductas asociadas al estado de ánimo y respuestas neuroinflamatorias, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en investigación neuropsiquiátrica y de neurobiología. La señalización serotoninérgica mediada por GPCR que involucra a HTR7 también se ha investigado en contextos de sueño y fenotipos afectivos, por lo que resulta relevante para estudios centrados en vías de señalización de neurotransmisores y homeostasis celular.

SR-7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HTR7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SR-7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HTR7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HTR7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SR-7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HTR7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SR-7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SR-7 en células tumorales con expresión de HTR7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.