Plásmido Doble Nickase (h) SR-2C: sc-400886-NIC

HTR2C codifica el receptor humano de serotonina 2C (SR-2C), un receptor acoplado a proteína G que se acopla principalmente a Gq/11 para estimular la señalización de la fosfolipasa C, el recambio de fosfatos de inositol, la movilización de Ca2+ intracelular y la actividad de la vía PKC/MAPK aguas abajo. SR-2C modula la excitabilidad neuronal y la transmisión sináptica, con funciones destacadas en la regulación del apetito, las conductas relacionadas con el estado de ánimo y el control neuroendocrino. El receptor también está modulado por la edición de ARN, que altera la respuesta a ligandos y el sesgo de señalización, añadiendo una capa adicional de regulación postranscripcional. La desregulación de la señalización de HTR2C y de los patrones de edición se ha vinculado a fenotipos neuropsiquiátricos y metabólicos, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de la circuitería serotoninérgica y de la dinámica de las vías de los GPCR.

SR-2C El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HTR2C en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HTR2C. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HTR2C. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HTR2C alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.