Plasmide CRISPR d'Activation (h) SR-2A: sc-401532-ACT

HTR2A code le récepteur humain de la sérotonine 5‑HT2A (SR‑2A), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gq/11 pour stimuler la signalisation via la phospholipase C, la production de phosphates d’inositol, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et des cascades en aval dépendantes de la PKC. L’activité de SR‑2A s’articule avec les voies MAPK/ERK et d’autres programmes transcriptionnels dépendants de l’activité, qui façonnent l’excitabilité neuronale, la plasticité synaptique et le fonctionnement des circuits corticaux. Dans le système nerveux central, l’expression de HTR2A et la dynamique de sa signalisation sont souvent étudiées en lien avec l’intégration des neurotransmetteurs et le dialogue entre récepteurs, qui influencent des états de réseau pertinents pour le comportement. Des altérations de la signalisation sérotoninergique impliquant SR‑2A ont été associées dans la littérature à la biologie de troubles neuropsychiatriques, notamment la schizophrénie, les troubles de l’humeur et des voies liées à la migraine, ce qui étaye son utilisation comme cible mécanistique dans des modèles de neurosciences cellulaires et des systèmes.

SR-2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HTR2A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SR-2A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HTR2A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HTR2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SR-2A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HTR2A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SR-2A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SR-2A dans les cellules tumorales présentant une expression de HTR2A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.