Plásmido Doble Nickase (h) Squalene synthetase: sc-403845-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Squalene synthetase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Squalene synthetase (h) y el plásmido de doble nickasa Squalene synthetase (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FDFT1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Squalene synthetase Anticuerpo (A-7): sc-271602
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Squalene synthetase | sc-403845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Squalene synthetase | sc-403845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FDFT1 codifica la escualeno sintasa, una enzima asociada al retículo endoplásmico que cataliza el primer paso comprometido de la biosíntesis de esteroles al convertir dos moléculas de difosfato de farnesilo en escualeno. Esta reacción conecta la vía del mevalonato con la producción posterior de colesterol, coordinando la biogénesis de membranas, la organización de balsas lipídicas y la síntesis de metabolitos derivados de esteroides. Al controlar el flujo hacia la síntesis de esteroles, la escualeno sintasa influye en la homeostasis lipídica celular y en la regulación por retroalimentación de programas transcripcionales sensibles al colesterol. La desregulación del metabolismo de esteroles dependiente de FDFT1 se ha investigado en contextos de biología metabólica y cardiovascular, neurobiología y estados proliferativos en los que se altera la actividad de la vía del mevalonato.
Squalene synthetase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FDFT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FDFT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FDFT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FDFT1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.