Plásmido Doble Nickase (h) Squalene epoxidase: sc-402870-NIC

SQLE codifica la epoxidasa de escualeno, una monooxigenasa dependiente de flavina que cataliza la epoxidación del escualeno a 2,3-oxidoescualeno, un paso temprano que influye en la velocidad de la biosíntesis de colesterol y esteroles. Como enzima asociada al retículo endoplásmico, ayuda a regular la homeostasis de esteroles y se integra con el flujo de la vía del mevalonato, la dinámica de las gotas lipídicas y el control por retroalimentación de la composición de la membrana. La alteración de la actividad de SQLE puede remodelar los perfiles lipídicos celulares, afectando plataformas de señalización y la adaptación metabólica bajo estrés. La regulación alterada de la biosíntesis de esteroles en la que participa SQLE se ha asociado con fenotipos relacionados con dislipidemias y con la reprogramación metabólica observada en múltiples contextos de enfermedad, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en la investigación del metabolismo lipídico.

Squalene epoxidase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SQLE en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SQLE. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SQLE. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SQLE alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.