SPRN CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407259

Übersicht

SPRN kodiert das Schatten-Prionprotein (Shadoo), ein über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes Membranprotein, das im Nervensystem besonders stark vertreten ist und mit der Prionbiologie in Zusammenhang steht. Shadoo weist strukturelle und funktionelle Gemeinsamkeiten mit Proteinen der PRNP-Familie auf und wird mit Prozessen wie der Proteinkontrolle/-qualitätskontrolle, der Organisation von Membran-Mikrodomänen und zellulären Stressantworten in Verbindung gebracht. Eine veränderte SPRN-Expression wurde in experimentellen Modellen mit einer erhöhten Anfälligkeit für Prionerkrankungen und neurodegenerativen Phänotypen assoziiert, was seine Relevanz für Signalwege unterstreicht, die Proteostase und neuronale Überlebensfähigkeit regulieren. Die Untersuchung von SPRN trägt dazu bei zu klären, wie prionähnliche Proteinnetzwerke die Aufrechterhaltung von Synapsen und die Reaktionen auf Stress durch fehlgefaltete Proteine beeinflussen.

Das SPRN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SPRN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SPRN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SPRN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SPRN-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SPRN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SPRN-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SPRN-Exone abzielen, die für die SPRN-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SPRN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SPRN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SPRN CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SPRN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SPRN HDR-Plasmid (h) und SPRN HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SPRN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SPRN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.