SPRN Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407259

Descripción general

SPRN codifica la proteína priónica sombra (Shadoo), una proteína de membrana anclada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) enriquecida en el sistema nervioso e implicada en la biología relacionada con los priones. Shadoo comparte características estructurales y funcionales con proteínas de la familia PRNP y se asocia a procesos como el control de calidad proteico, la organización de microdominios de membrana y las respuestas celulares al estrés. La alteración de la expresión de SPRN se ha relacionado con la susceptibilidad a enfermedades priónicas y con fenotipos neurodegenerativos en modelos experimentales, lo que respalda su relevancia en vías que regulan la proteostasis y la viabilidad neuronal. Investigar SPRN ayuda a aclarar cómo las redes de proteínas de tipo prión influyen en el mantenimiento sináptico y en las respuestas al estrés por proteínas mal plegadas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SPRN (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SPRN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SPRN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SPRN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SPRN.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SPRN para la investigación de la señalización de SPRN, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SPRN críticos para la función de SPRN
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SPRN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SPRN CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SPRN CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SPRN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SPRN (h) y el plásmido HDR SPRN (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SPRN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SPRN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.