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SPOP慢病毒激活颗粒(h) | sc-401290-LAC | 200 µl | $455.00 |
人类 SPOP(speckle-type POZ protein,斑点型 POZ 蛋白)是 CUL3–RBX1 E3 泛素连接酶复合物的底物适配器,可促进多种核内与胞质蛋白的泛素化及其依赖蛋白酶体的周转降解。通过调控蛋白稳定性,SPOP 影响转录程序、染色质相关过程、DNA 损伤应答,以及包括雄激素受体与 PI3K–AKT 通路组分在内的信号网络。SPOP 介导的泛素信号一旦受到扰动,可能重塑细胞稳态与应激反应,因此 SPOP 是研究蛋白质稳态(proteostasis)与通路串扰的重要关键节点。SPOP 功能及其底物识别的改变与癌症相关机制有关,包括在肿瘤相关背景下转录因子丰度失衡以及异常的信号输出。
SPOP 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 SPOP 表达。
SPOP 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在SPOP转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性SPOP表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 SPOP 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。