Particules Lentivirales d'Activation (h) SphK1: sc-401274-LAC

SPHK1 code la sphingosine kinase 1 (SphK1), une kinase lipidique cytosolique qui phosphoryle la sphingosine pour générer la sphingosine-1-phosphate (S1P), un lipide de signalisation bioactif qui régule la survie cellulaire, la prolifération, la motilité et la signalisation inflammatoire. En modifiant l’équilibre céramide/sphingosine/S1P, SphK1 intègre les réponses au stress et les signaux métaboliques au remodelage des lipides membranaires et à la signalisation en aval via les récepteurs de la S1P et des effecteurs intracellulaires. L’activité de SPHK1 influence notamment les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK, NF-κB, ainsi que la dynamique du cytosquelette, reliant le métabolisme des sphingolipides à des processus associés à l’angiogenèse et à la modulation immunitaire. Une expression dérégulée de SPHK1 ou une signalisation anormale de la S1P a été associée à des contextes de signalisation oncogénique, à la fibrose et à des états inflammatoires chroniques, ce qui en fait une cible utile pour disséquer la transduction de signaux médiée par les lipides et les transitions d’état cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales SphK1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SPHK1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SphK1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SPHK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SphK1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SPHK1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.