Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SphK1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401274-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SphK1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SphK1 Double-Nickase-Plasmid (h) und SphK1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SPHK1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SphK1: sc-365401
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SphK1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401274-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SphK1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401274-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPHK1 kodiert die Sphingosinkinase 1 (SphK1), eine Lipidkinase, die Sphingosin phosphoryliert und dadurch Sphingosin-1-phosphat (S1P) bildet. S1P ist ein bioaktives Sphingolipid, das Zellüberleben, Proliferation, Migration und inflammatorische Signalübertragung beeinflusst. Indem SphK1 das Gleichgewicht zwischen proapoptotischem Ceramid/Sphingosin und dem überlebensfördernden S1P verschiebt, ist sie Teil des „Sphingolipid-Rheostaten“ und integriert Signale aus Wachstumsfaktor- und Zytokinwegen. Das von SphK1 gebildete S1P kann sowohl intrazellulär wirken als auch über S1P-Rezeptoren nachgeschaltete Programme modulieren, darunter MAPK/ERK-, PI3K/AKT- und NF-κB-Signalwege sowie angiogene Antworten. Eine Fehlregulation der SPHK1/S1P-Signalgebung wurde mit onkogenen Phänotypen, Fibrose und immunvermittelter Entzündung in Verbindung gebracht, weshalb sie als Knotenpunkt in krankheitsrelevanten Signalnetzwerken intensiv untersucht wird.
SphK1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SPHK1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SPHK1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SPHK1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SPHK1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.