SPAG5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403607-LAC

SPAG5 (antigene associato agli spermatozoi 5; noto anche come astrina) codifica una proteina associata ai microtubuli e ai cinetocori che coordina l’allineamento dei cromosomi e la dinamica del fuso durante la mitosi. Agisce all’interno del checkpoint mitotico e del macchinario di aggancio cinetocoro–microtubulo per favorire una corretta segregazione dei cromatidi fratelli e mantenere la stabilità del genoma. Un’espressione alterata di SPAG5 è stata collegata a fenotipi proliferativi, aneuploidia e deregolazione della progressione del ciclo cellulare in diversi contesti rilevanti per il cancro, rendendolo un nodo utile per lo studio del controllo mitotico e dell’instabilità cromosomica. SPAG5 viene pertanto spesso analizzato in vie che coinvolgono l’assemblaggio del fuso, la funzione del centrosoma e le risposte allo stress connesse a divisioni aberranti.

Le particelle di attivazione lentivirale SPAG5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SPAG5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SPAG5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SPAG5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SPAG5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SPAG5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.