Sp9 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-436278

Descripción general

Sp9 (factor de transcripción Sp9) es un miembro de la familia Sp/KLF de proteínas que se unen a cajas GC y que regula programas de expresión génica que controlan decisiones de destino celular durante el desarrollo embrionario. En el ratón, la actividad de Sp9 se ha vinculado a procesos de patrón y diferenciación en el sistema nervioso central y en las extremidades, donde coordina redes transcripcionales que influyen en la proliferación de progenitores y la morfogénesis tisular. Como regulador nuclear de unión al ADN, Sp9 se integra en contextos más amplios de señalización del desarrollo, incluidas vías que convergen en la arquitectura de potenciadores y promotores para ajustar la transcripción específica de linaje. La función desregulada de factores de transcripción del desarrollo se asocia con frecuencia con fenotipos congénitos y defectos del neurodesarrollo, lo que convierte a Sp9 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de los circuitos de regulación génica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Sp9 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sp9 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sp9 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sp9 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Sp9.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sp9 para la investigación de la señalización de Sp9, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sp9 críticos para la función de Sp9
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sp9 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Sp9 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Sp9 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sp9. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Sp9 (m) y el plásmido HDR Sp9 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sp9 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sp9 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.