Plásmido CRISPR de Activación (h) SP140: sc-409816-ACT

SP140 codifica una proteína nuclear con patrón puntiforme (“speckled”) que contiene dominios PHD y bromodominio, y que actúa como lectora de cromatina y reguladora transcripcional, con expresión enriquecida en linajes inmunitarios. Participa en el control epigenético de programas génicos vinculados a respuestas inmunes innatas y adaptativas, e influye en vías como la señalización de interferón y redes transcripcionales inflamatorias. Mediante interacciones con histonas modificadas y complejos asociados a la cromatina, SP140 contribuye a moldear la expresión génica específica de linaje y los estados de activación celular. Estudios genéticos y de expresión han asociado la desregulación de SP140 con la susceptibilidad a enfermedades inmunomediadas e inflamatorias, lo que respalda su relevancia para la investigación mecanística en inmunología y biología de la cromatina.

SP140 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SP140 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SP140 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SP140 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SP140, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SP140. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SP140 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SP140 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SP140 en células tumorales con expresión de SP140 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.