Sox9 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400143-LAC

Il gene umano **SOX9** codifica per il fattore di trascrizione Sox9, una proteina legante il DNA con dominio **HMG box** (high-mobility group) che controlla la specificazione di linea cellulare e la definizione dei pattern tissutali durante lo sviluppo. Sox9 regola la condrogenesi e la scheletrogenesi attraverso reti trascrizionali che intersecano la segnalazione **TGF-β/BMP** e coordinano programmi genici della matrice extracellulare, come **COL2A1** e **ACAN**. In contesti epiteliali, SOX9 contribuisce al mantenimento e alla differenziazione di cellule staminali/progenitrici integrando stati trascrizionali associati a **Wnt/β-catenina** e **Notch**. Un’attività disregolata di SOX9 è implicata in disturbi dello sviluppo che colpiscono la formazione della cartilagine e la determinazione del sesso, ed è spesso studiata per il suo ruolo nella riprogrammazione trascrizionale oncogenica e nella plasticità cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale Sox9 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SOX9 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Sox9 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SOX9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Sox9. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SOX9 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.