Sox9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400143-ACT

SOX9 codifica o fator de transcrição Sox9, uma proteína de ligação ao DNA do tipo grupo de alta mobilidade (HMG) que regula a especificação de linhagens e programas de diferenciação, incluindo a condrogênese e o desenvolvimento de múltiplos tecidos epiteliais. O Sox9 integra sinais de vias como TGF-β/BMP, WNT/β-catenina, Hedgehog e Notch para controlar a atividade de enhancers e a acessibilidade da cromatina durante decisões de destino celular. Na biologia humana, a expressão desregulada de SOX9 está associada a distúrbios do desenvolvimento e é frequentemente implicada em redes transcricionais associadas ao câncer, nas quais a atividade alterada de Sox9 pode influenciar a proliferação, estados semelhantes aos de células-tronco e a plasticidade epitélio–mesenquimal. Como regulador dependente do contexto, SOX9 é amplamente estudado em modelos de desenvolvimento de órgãos, diferenciação de células-tronco e mecanismos de controle transcricional em estados celulares relevantes para doenças.

Sox9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOX9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOX9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOX9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOX9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox9 em células tumorais com expressão de SOX9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.