Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Sox2 Double Nickase Plasmid (m2): sc-423086-NIC-2
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Sox2 Double Nickase Plasmid (m2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Sox2 Double-Nickase-Plasmid (m2) und Sox2 Double-Nickase-Plasmid (m22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sox2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Sox2: sc-365823
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Sox2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423086-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen Sox2 kodiert den SRY-Box-Transkriptionsfaktor SOX2, einen zentralen Regulator von Pluripotenz und Selbsterneuerung, der mit OCT4 und NANOG zusammenwirkt, um die Identität embryonaler Stammzellen aufrechtzuerhalten und zugleich eine verfrühte Festlegung auf bestimmte Zelllinien zu verhindern. SOX2 bindet an Enhancer- und Promotorelemente, um Transkriptionsprogramme zu steuern, die die Spezifikation des Neuroektoderms, die Aufrechterhaltung neuraler Stamm- und Vorläuferzellen sowie Übergänge des Chromatinzustands regulieren, und es integriert dabei Signalinputs wie WNT, FGF, BMP und SHH, die die Entwicklungsmusterung prägen. Eine fehlregulierte Sox2-Expression oder veränderte Dosierung wird mit Defekten in der frühen Embryogenese und der Neuroentwicklung in Verbindung gebracht, und veränderte SOX2-Regulationsnetzwerke werden häufig im Zusammenhang mit stammzellähnlichen Zuständen in der Krebsbiologie untersucht. Geneditierung von Sox2 in der Maus ermöglicht die mechanistische Untersuchung transkriptioneller Schaltkreise, von Enhancer-Funktionen, Zellschicksalsentscheidungen und Reprogrammierungs-Workflows in Entwicklungs- und Krankheitsmodellsystemen.
Sox2 Das Double-Nickase-Plasmid (m2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sox2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sox2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sox2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sox2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.