Sos 1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401135-LAC

SOS1 kodiert Son of sevenless homolog 1 (Sos1), einen Ras-Guaninnukleotid-Austauschfaktor (GEF), der nach Aktivierung von Rezeptor-Tyrosinkinasen und Adapterkomplexen wie GRB2 den Austausch von GDP gegen GTP an RAS katalysiert. Indem Sos1 Wachstumsfaktor-Signale an die RAS–RAF–MEK–ERK-Kaskade koppelt und mit der Aktivität des PI3K–AKT-Signalwegs interagiert, trägt es zur Regulation von Proliferation, Differenzierung, Migration und Zytoskelettdynamik bei. Eine veränderte SOS1-Funktion oder eine fehlregulierte upstream-Signalübertragung kann den MAPK-Output verschieben und ist relevant für Studien zu Abhängigkeiten onkogener Signalwege sowie zu entwicklungsbiologischen, mit Rasopathien assoziierten Mechanismen. SOS1 ist daher ein nützlicher Knotenpunkt, um in menschlichen Zellen stimuli-spezifische MAPK-Amplitude und -Dauer, Feedback-Kontrolle und Crosstalk zwischen Signalwegen zu untersuchen.

Sos 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SOS1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Sos 1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SOS1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Sos 1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SOS1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.