Plásmido Doble Nickase (h) SNX1: sc-404470-NIC

Sorting nexin 1 (SNX1) es una proteína endosomal que contiene un dominio PX, se une al fosfatidilinositol 3-fosfato y coopera con el complejo retromer para regular la clasificación endosomal y el transporte retrógrado desde los endosomas hasta la red trans-Golgi. Al dar forma a los túbulos de membrana endosomal e influir en el tráfico de receptores, SNX1 ayuda a controlar el reciclaje y la reducción de múltiples receptores de señalización, vinculándose a vías como EGFR y otras redes de receptores tirosina quinasa. El tráfico dependiente de SNX1 afecta procesos de homeostasis celular, incluyendo el recambio de proteínas de membrana, la captación de nutrientes y la atenuación de la señalización. La desregulación de la expresión o la función de SNX1 se ha asociado con señalización alterada de receptores y dinámica endosomal, tal como se ha descrito en contextos de investigación sobre biología del cáncer y neurodegeneración.

SNX1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SNX1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SNX1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SNX1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SNX1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.