SNARK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405079

概要

NUAK2はSNARK（SNF1/AMPK関連キナーゼ）をコードしており、AMPK関連キナーゼファミリーに属するセリン／スレオニンキナーゼです。SNARKは細胞のエネルギー状態を適応的なシグナル伝達プログラムへと結び付けます。SNARKはLKB1/STK11の下流で活性化され、細胞骨格の再構築、細胞接着と遊走、ならびにストレス応答性の代謝制御に影響を与えるリン酸化ネットワークに関与します。報告されている機能から、NUAK2は上皮間葉転換（EMT）を制御する経路、Hippo/YAPに関連する転写出力、そして状況依存的な増殖・生存制御に結び付けられています。NUAK2/SNARK活性の異常はがん生物学や浸潤性表現型と関連づけられており、代謝―運動性カップリングの機構研究における標的としての有用性が示唆されています。

SNARK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNUAK2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NUAK2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NUAK2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SNARKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SNARKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NUAK2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SNARKの機能に不可欠なNUAK2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NUAK2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SNARK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSNARK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NUAK2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SNARK HDRプラスミド（h）および SNARK HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNUAK2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNUAK2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。