Plasmide CRISPR d'Activation (m) SNAI 1: sc-423047-ACT

Snai1 code le facteur de transcription à doigts de zinc SNAI1, un régulateur maître de la transition épithélio-mésenchymateuse (TEM/EMT) qui réprime des gènes de jonction épithéliale tels que Cdh1 et remodèle les programmes du cytosquelette et de l’adhérence cellulaire. Dans les cellules de souris, SNAI1 intègre des signaux provenant des voies TGF-β, WNT/β-caténine, Notch et de la signalisation associée à l’hypoxie afin de contrôler la plasticité de lignée, la motilité et les interactions avec la matrice extracellulaire. Ce réseau transcriptionnel est central pour la morphogenèse embryonnaire et le remodelage tissulaire, et une activité dérégulée de SNAI1 est fréquemment étudiée dans les contextes de fibrose et de biologie tumorale invasive. Les programmes dépendants de SNAI1 croisent également la signalisation inflammatoire et le maintien d’états cellulaires de type souche, ce qui souligne sa large pertinence pour la recherche mécanistique sur les voies de signalisation.

SNAI 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Snai1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SNAI 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Snai1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Snai1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SNAI 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Snai1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SNAI 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SNAI 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Snai1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.